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血友病的病因之一是由于基因TPO突变而不能合成凝血因子。目前该病的临床治疗主要有两种基因疗法(如下图所示)。图中方法一是将基因工程菌生产的凝血因子注入患者体内;方法二是用含目的基因的重组病毒感染患者,使患者获得病毒直接提供的凝血因子。目前主要选择腺相关病毒(简称AAV)作为治疗用基因载体。AAV是有衣壳、无包膜的DNA小病毒,基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap,以及其他基因,但缺乏复制激活基因E,所以,AAV感染细胞后不会复制,对人体安全。当AAV和其他DNA病毒(含有基因E)同时感染人体细胞后,AAV会被激活复制、表达,形成病毒粒子(含DNA和衣壳),病毒粒子具有侵染能力。AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子。

(1)过程①②需要用的工具酶有   
(2)经过②过程得到的重组AAV中去除了基因rep、cap,缩短了AVV的长度,使得AAV能结合   ;重组AAV转染细胞产生病毒粒子,需要人工重组辅助质粒,这是因为   
(3)③过程转染细胞产生的病毒粒子中可能含有的质粒是   ,因此需要对用于基因治疗的病毒粒子进行检验、提纯。
(4)④过程需要用到   等技术。实验发现,用昆虫细胞、酵母菌、人体细胞承担重组质粒与重组AAV的转染,都能收集到凝血因子,这一现象说明   
(5)⑥过程采用患者细胞作为感染的受体细胞,可以避免   反应;相对于⑤治疗方法,⑥治疗方法的优点是:   

科目 生物   题型 综合题   难度 中等
知识点: 生物技术中的伦理问题
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VEGF和PIGF均能促进干细胞生长,干细胞分化后细胞内会明显增加,可用判断干细胞是否分化。
实验材料:
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实验思路:
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(2)取动物细胞培养瓶,平均分成若干组,并标号,每组设置若干个重复,每个培养瓶   
(3)                                   
(4)在      中培养一段时间后,用试剂盒检测培养液中Akt蛋白含量,统计并分析所得数据。
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