人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）htPA基因与载体用______________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用______________技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射 ，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用 技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。
（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。
玉米非糯性基因(A)对糯性基因（a）是显性，植株紫色基因对植株绿色玉米非糯性基因（A)对糯性基因（a)是显性，植株紫色基因（B) 对植株绿色基因（b)是显性，这两对等位基因分别位于第9号和第6号染色体上。玉米非糯性籽粒及花粉遇碘液变蓝色，糯性籽粒及花粉遇碘液变棕色。现有非糯性紫株、非糯性绿株和糯性紫株三个纯种品系供实验选择。请回答：
（1）若采用花粉鉴定法验证基因分离定律，应选择非糯性紫株与糯性紫株杂交。如果用碘液处理F1代所有花粉，则显微镜下观察到花粉颜色及比例为___ ___。
（2）若验证基因的自由组合定律，则两亲本基因型为__ ____。如果要筛选糯性绿株品系需在第______年选择糯性籽粒留种，下一年选择______自交留种即可。
（3）当用X射线照射亲本中非糯性紫株玉米花粉并授于非糯性绿株的个体上，发现在F1代734株中有2株为绿色。经细胞学的检查表明，这是由于第6号染色体载有紫色基因（B)区段缺失导致的。已知第6号染色体区段缺失的雌、雄配子可育，而缺失纯合体（两条同源染色体均缺失相同片段）致死。
①在上述F1代绿株的幼嫩花药中观察下图所示染色体，请根据题意在图中选择恰当的基因位点并在位点上正确标出F1代绿株的基因组成。
②有人认为F1代出现绿株的原因可能是经X射线照射的少数花粉中紫色基因（B)突变为绿色基因（b)，导致F1代绿苗产生。某同学设计了以下杂交实验，探究X射线照射花粉产生的变异类型。
实验步骤：
第一步：选F1代绿色植株与亲本中的____ __杂交，得到种子（F2代）；第二步：F2代植株的自交，得到种子（F3代）；第三步：观察并记录F3代植株颜色及比例。
结果预测及结论：
若F3代植株的紫色:绿色为___ ___，说明花粉中紫色基因（B)突变为绿色基因（b)，没有发生第6染色体载有紫色基因（B)的区段缺失。
若F3代植株的紫色:绿色为___ __，说明花粉中第6染色体载有紫色基因(B)的区段缺失。
科研人员为研究土壤pH对粳型杂交稻幼苗光合特性的影响进行了相关实验，步骤如下：
①将消毒后生理状态良好且相同的水稻幼苗分别置于pH为4.0、5.0、6.0、7.0和8.0的培养液培养，其它条件适宜；
②培养一段时间后，测定水稻幼苗叶片光合速率、呼吸速率及叶绿素a、叶绿素b的含量，计算叶绿素总量和叶绿素a/b的值，结果如下图。
分析回答：
(1)培养水稻幼苗的过程中，隔天更换培养液，除了可以防止缺氧造成烂根和营养不足之外，还能防止培养液 的改变，影响实验结果。
(2)测定叶绿素含量前，需要提取叶绿素。提取的方法是：在剪碎的绿叶中加入SiO2、 、 后快速研磨，经过滤获得色素滤液。
(3)测定水稻幼苗叶片呼吸作用速率时需在 条件下进行。
(4)由图乙可知，水稻对pH的适应范围较广，在 范围内对水稻的生长影响不大。结合甲图分析，pH的变化主要导致 的变化，从而影响光合速率。
(5)若pH为4.0时，水稻幼苗要正常生长，每天适宜的光照时间不少于 小时。
2011年11月,我国首例“第三代试管婴儿”(设计试管婴儿)在上海诞生,这是上海生殖辅助技术领域一个新的里程碑。请回答下列问题:
(1)第一代试管婴儿针对女性输卵管堵塞患者,用穿刺针将____________________(细胞)取出,采集的细胞需要在体外培养到________________,才能与________________受精。第二代试管婴儿则针对男性少、弱、畸形精子症患者,通过______________技术将精子注入卵母细胞内帮助受精。第三代试管婴儿只是在胚胎移植前____________________,从而帮助更多的家庭生出健康的宝宝。
(2)试管婴儿操作过程中需在_________________℃条件下及______________环境中进行。用来培养受精卵的营养液除含水和无机盐以外,还需添加___________________等物质。
(3)母体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生________________,这为胚胎在母体内存活提供了可能。
(4)现在我国大多数人反对设计婴儿性别,原因是_______________________，在进行试管婴儿设计时一定不能违反__________________。
（5）试管婴儿技术主要用到了胚胎工程中的_______________技术和_____________技术，同时还用到了细胞工程中的____________技术。
【生物—选修1：生物技术实践】回答下列有关基因工程问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是_____________________________________________，主要从_______________中提取。
图所示的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明。
酶M特异性剪切的DNA片段是___________，则酶N特异性剪切的DNA片段是 ____________________。
多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有 ____________种。
图的A和B分别表示两段DNA序列。表格分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。
（3）据图：假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图A所示，则应选择表格中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图A和B所示，则应选择表中酶__________进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图B所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。
图甲是目的基因EPSPS（4.0kb，1kb=1000对碱基）与pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成某种酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
（5）将处理后的目的基因EPSPS与pUC18质粒、DNA连接酶混合后，再与某菌种混合，若要从混合物中筛选出含EPSPS基因的菌株，在图三十二乙的培养基中必须加入________________________。请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种颜色菌落会含有重组质粒___________。
（6）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和_______________kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因是______________________________________________。
(8分)实验人员用脱落酸和脱落酸抑制剂处理“百丽”桃,“百丽”桃在成熟过程中硬度、乙烯释放量和呼吸速率的变化如图所示。
(1)果实的硬度与植物细胞膜外的_______________(填细胞结构名称)有关,其主要成分中一种多糖的单体是___________________。
(2)由图甲可知,使用脱落酸处理能够使细胞中_____________酶和果胶酶的活性______(填“增大”或“减小”),从而使果实的硬度下降。
(3)由图可知,所研究的因变量中,______________________的变化趋势相同,且经脱落酸处理后可使两者变化曲线的峰值_____________________出现。
(4)由图可知,若将“百丽”桃进行长距离运输,可在运输前用__________________处理,从而延长保鲜时间。