Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的________。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到________期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的________设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有________________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
2009年10月,我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书。下图表示该抗虫水稻主要培育流程,据图回答:
(1)④过程应用的主要生物技术是____________________________________________。
(2)②过程中将含杀虫基因的重组质粒导入土壤农杆菌常用的方法是
(3)组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图(显示部分基因及部分限制性内切酶作用位点),据图分析:
①人工改造时,要使抗虫基因表达,还应插入__________________________。
②人工改造时用限制酶Ⅱ处理,其目的是:第一,去除质粒上的(基因),保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长;第二,使质粒带有单一限制酶作用位点,有利于;第三,使质粒大小合适,可以提高转化效率等。
③若用限制酶Ⅱ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子,并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞,观察到的细胞生长的现象是:。
(4)若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的黏性末端为,则该酶识别的核苷酸序列是。
知SARS是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原,在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗,开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下:
(1)实验步骤①所代表的反应过程是。
(2)步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用__________________________。
(3)如果省略步骤②而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌,一般情况下,不能得到表达的S蛋白,其原因是S基因在大肠杆菌中不能________,也不能______________。
(4)为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特征,可用________与________进行抗原—抗体特异性反应实验,从而得出结论。
(5)步骤④和⑥的结果相比,原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列________(填“相同”或“不同”),根本原因是____________________________________。
豇豆对多种害虫具有抗虫能力,根本原因是豇豆体内具有胰蛋白酶和抑制剂基因(CPTI基因)。科学家将其转移到水稻体内后,却发现效果不佳,主要原因是CPTI蛋白质的积累量不足。经过在体外对CPTI基因进行了修饰后,CPTI蛋白质在水稻中的积累量就得到了显著提高。修饰和表达过程如下图所示:根据以上材料,回答下列问题:
(1)CPTI基因是该基因工程中的基因,“信号肽”序列及“内质网滞留信号”序列的基本组成单位是,在a过程中,首先要用酶切出所需基因并暴露出,再用连接。
(2)b过程称为。主要场所,c过程为。
(3)检测修饰后的CPTI基因是否正常高效达的简便方法是。
下图是牛的胚胎分割示意图。请据图回答问题;
(1)进行胚胎分割时,应选择发育到时期的胚进行操作。
(2)②指的是。
(3)如果想通过该示意图繁殖出大量的优质奶牛,则精子中的性染色体应为。
(4)对胚胎进行分裂时,要特别注意将均等分割,否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。来自同一胚胎分割产生的后代具有相同的遗传物质,因此,胚胎分割可以看作动物繁殖的方法之一。
(5)度分割出的少量胚体细胞还可用来做性别鉴定,该技术常采用的方法是。
(6)早期胚胎中胚胎干细胞,不仅可以用与哺乳动物胚胎性别鉴定,还可以被应用
等领域。
下图是单克隆抗体制备流程示意图:
(1)技术是单克隆抗体技术的基础。
(2)从图中可以看出HAT培养基具有作用。
(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比,最主要的优点是。
(4)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞无限特点,又具备淋巴细胞分泌的
特点,经过选择性培养的杂交瘤细胞,还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次
,才能获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。最后将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或在小老鼠腹腔内增殖,从细胞培养液中或从小老鼠腹腔的中,就可以提取出大量的单克隆抗体了。
(5)淋巴细胞是由动物体中的细胞分化、发育而来。