2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来 ，因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端 。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是 。如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是 。
（3）可以利用基因工程的方法对猪的器官进行改造，将器官供体基因组导入 ,以抑制 ，或设法除去 ，再结合克隆技术，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。
（4）以下有关绿色荧光蛋白转基因克隆猪的叙述正确的是
| A．该转基因克隆猪的绝大部分性状同受体母猪 |
| B．绿色荧光蛋白转基因克隆猪一定是雌性的 |
| C．受体母猪对移入的早期胚胎一般不会发生免疫排斥反应 |
| D．绿色荧光蛋白基因常取自水母的基因组文库 |
（5）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是： （用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）
④表达出蓝色荧光蛋白。
已知血友病是由X染色体上的隐性基因(b)控制的。现有一对刚刚结婚的青年夫妇，夫妇双方都正常，但女方的弟弟是血友病患者(其父母正常)。请根据题意回答问题。
(1)据此夫妇及其家庭成员的遗传病情分析，此夫妇的基因型为：男 ；女 。
(2)医生建议这对夫妇在生育之前，应进行遗传咨询。假如你是医生，你认为这对夫妇的后代患血友病的风险率为 ％。
（3）这对夫妇若想要一个健康的后代，最好生一个 孩。理由是 。
现有4个纯合南瓜品种，其中2个品种的果形表现为圆形（圆甲和圆乙），1个表现为扁盘形（扁盘），1个表现为长形（长）。用这4个南瓜品种做了3个实验，结果如下：
实验1：圆甲×圆乙，F1为扁盘，F2中扁盘：圆：长 = 9 ：6 ：1
实验2：扁盘×长，F1为扁盘，F2中扁盘：圆：长 = 9 ：6 ：1
实验3：用长形品种植株的花粉分别对上述两个杂交组合的F1植株授粉，其后代中扁盘：圆：长均等于1：2 ：1。综合上述实验结果，请回答：
（1）南瓜果形的遗传受＿＿＿＿对等位基因控制，且遵循＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿定律。
（2）若果形由一对等位基因控制用A、a表示，若由两对等位基因控制用A、a和B、b表示，以此类推，则圆形的基因型应为＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，扁盘的基因型应为＿＿＿＿＿＿＿＿，长形的基因型应为＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（3）为了验证（1）中的结论，可用长形品种植株的花粉对实验1得到的F2植株授粉，单株收获F2中扁盘果实的种子，每株的所有种子单独种植在一起得到一个株系。观察多个这样的株系，则所有株系中，理论上有1/9的株系F3果形均表现为扁盘，有＿＿＿＿的株系F3果形的表现型及数量比为扁盘：圆 =" 1" ：1 ，有＿＿＿＿的株系F3果形的表现型及数量比为＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
番茄的红果(A)对黄果(a)为显性，圆形果(R)对长形果(r)为显性。两对基因位于两对同源染色体上。用结红圆果和黄长果的番茄植株杂交，根据后代性状表现完成问题：
(1)若后代全是结红圆果的植株，则亲本的基因型是__________。
(2)若后代是结红圆果和红长果的植株，且数量大致相等，则亲本的基因型是_____。
(3)若后代是结红圆果和黄圆果的植株，且数量大致相等，则亲本的基因型是_。
(4)若后代是结红圆果、红长果、黄圆果、黄长果的植株，则亲本的基因型是_______
通过植物组织培养技术，可以快速繁殖、培育无病毒的植物。据图回答问题：
（1）紫草细胞中提取的紫草素是制造治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料。若要从大量培养的紫草愈伤组织中提取紫草素，不需要经过图中②________过程，且哪项条件是不需要的__________。
| A．消毒灭菌 | B．适宜温度 | C．充足光照 | D．适宜养料和激素 |
（2）用植物组织培养方法诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状体结构，若包裹上人造种皮，制成人工种子，则图中的C相当于种子结构中的，主要作用是_____________
圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置的培养基和的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的中挑取生长良好的菌株，分别接种到中；
⑤。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
| 反应条件 |
||
| 温度 |
时间 |
|
| 变性 |
95℃ |
30s |
| 复性 |
55℃ |
30s |
| 延伸 |
72℃ |
1min |
| 30个循环后 |
适宜 |
5-10min |
| 保温 |
4℃ |
2h |
| PCR反应体系 |
50ul |
| 缓冲液 |
5ul |
| 脱氧核苷酸 |
1ul |
| 引物A |
0.5ul |
| 引物B |
0.5ul |
| DNA聚合酶 |
0.5U |
| 模板DNA |
1-2ul |
| 加去离子水补足至50 ul |
①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是。
此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________________________。