为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：
图1 转基因操作流程图
表2 几种限制酶识别序列及切割位点表
(1)获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含____________的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入____________限制酶识别序列，这样设计的优点有利于质粒和目的基因定向连接。
(2)过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物质，若目的基因扩增4代，则共用了引物Ⅰ________个。
(3)请画出Pst Ⅰ切割DNA形成黏性末端的过程：__________________________。
(4)图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是____________________。
(5)在步骤⑤⑥过程中都需用__________________________处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用____________法。
(6)假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时有________个D基因。
“白菜—甘蓝”是用细胞工程方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长周期短、耐热性能强、易储存等优点。下为“白菜—甘蓝”的培育过程示意图，请据图完成下列问题：
（1）在上述过程中，去除细胞壁的方法是____________________________。
（2）图中的原生质体A和原生质体B能融合成一个杂种细胞，所依据的生物学原理是__________________________________________。
（3）自然状态下，白菜和甘蓝杂交不会成功，原因是____________________________。通过上述方法获得的“白菜—甘蓝“是否可育？____________________________，为什么？______________________________________________________________________。
（4）如果原生质体A为小鼠的效应B细胞，原生质体B为小鼠的骨髓瘤细胞，诱导二者融合时，通常用______________。融合后杂种细胞的特点是________________________________________________________ 。
在植物基因工程中，用土壤农杆菌中的Ti质粒作为运载体，把目的基因重组入Ti质粒上的TDNA片段中，再将重组的TDNA插入植物细胞的染色体DNA中。
（1）科学家在进行上述基因操作时，要用同一种_______分别切割质粒和目的基因，质粒的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过_______而黏合。
（2）将携带抗除草剂基因的重组Ti质粒导入二倍体油菜细胞，经培养、筛选获得一株有抗除草剂特性的转基因植株。经分析，该植株含有一个携带目的基因的TDNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，在该转基因植株自交F1代中，仍具有抗除草剂特性的植株占总数的_______，原因是
_____________________________________________________________。
（3）种植上述转基因油菜，它所携带的目的基因可以通过花粉传递给近缘物种，造成“基因污染”。如果把目的基因导入叶绿体DNA中，就可以避免“基因污染”，原因是______________。
基因工程自20世纪70年代兴起后，在短短的30年间，得到了飞速的发展，目前已成为生物科学的核心技术。
（1）据报道，至2007年1月29日，全球转基因作物种植面积突破1亿公顷，将目的基因导入农作物的方法有哪些？目的基因能否在农作物中稳定遗传的关键是什么？
（2）将目的基因导入微生物细胞常用的转化方法是：第一步：________________________；第二步：______________________________________________________________________。
（3）弯曲的蚕丝强度低于由蜘蛛拖牵的直丝，我国科研人员首次在世界上通过转基因的方法将“绿色荧光蛋白基因”与“蜘蛛拖牵丝基因”拼接后成功插入蚕丝基因组并获得表达。该操作中目的基因是什么？采用绿色荧光蛋白基因的主要目的是什么？
（4）目的基因能在受体细胞内获得表达的原因是什么？
下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图完成下列问题：
（1）在基因工程中，A→B为_______技术，利用的原理是______________，其中①为_____________________过程。
（2）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是_______，要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在分子水平上的鉴定过程（至少写出两个过程）。
科学家们将大鼠的生长激素基因与小白鼠的MT启动基因组成重组DNA分子，运用显微注射技术将这一重组DNA分子注射到小白鼠的受精卵中，再把此受精卵移植到雌鼠体内借腹怀胎，生出的小白鼠体内因带有大鼠的生长激素基因，故比其他小白鼠个头要大得多，人们称其为超级鼠。请根据以上资料分析完成下列问题：
（1）将大鼠的生长激素基因与小白鼠的MT启动基因组成重组DNA分子时，需要的工具酶有________；小白鼠的MT启动基因充当的工具是________________。
（2）目的基因在超级鼠体内成功表达的标志是________，大鼠的生长激素基因在小白鼠体内的表达过程_________________________________________________________________。
（3）请你给出两条人工合成该目的基因的途径：
①____________________________________________________________________________；
②____________________________________________________________________________。