自然界中能够产生生物荧光的酶的统称为荧光素酶。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用。
（1）荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是将 筛选出来。
（2）下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，右下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是 。
| 限制酶 |
Msp I |
BamH I |
Mbo I |
Sma I |
| 酶切位点 |
 |
 |
 |
 |
（3）利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用 的原理，使荧光素酶基因数量呈 方式增加。
（4）迄今为止，可将上述具有荧光素酶基因的运载体导入动物细胞的技术，应用最多的、最有效的是 。经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的 或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。
（5）囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割，可以提高胚胎的利用率，但在进行分割时应注意 。
（6）荧光素酶在ATP的参与下，可使荧光素发出荧光。生物学研究中常利用“荧光素－荧光素酶发光法”来测定样品中ATP的含量。某研究小组对“测定ATP时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”进行了探究。
【实验材料】1×10－8mol/LATP标准液、缓冲溶液、70mg/L荧光素溶液（过量）、浓度分别为10、20、30、40、50、60、70mg/L的荧光素酶溶液。
【实验结果】见下图。
【实验分析与结论】
①实验过程：为使结果更加科学准确，应增设一组 作为对照。除题目已涉及的之外，还需要严格控制的无关变量有 （至少写出一个）。
②实验结果：由图C可知， 点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。
（7）食品卫生检验中，可利用上述方法测定样品中细菌的ATP总含量，进而测算出细菌的数量，判断食品污染程度。测算的前提是每个细菌细胞中ATP的含量 。
(16分) 玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下：
（1）玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供________。发酵过程中检测酵母菌数量可采用_______法或活菌计数法。
（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用_______法或________法从玉米胚芽中提取。
（3）玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用________技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。
（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐高温的_______催化。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、_______和_______三步。
果粒生产在中国尚属起步阶段。果粒除了可直接食用外还可作为配料加入到酸奶、冰淇淋、果冻等食品中。果胶酶作为一种新型加工助剂，可将果粒的组织结构损坏程度减到最小，最大限度地提高成型果粒的含量。根据以上内容回答下列问题。
（1）果胶酶作为一种果粒加工助剂，它能将果胶分解成可溶性的______________，由酶的______性可知，组成果粒的另一成分__________不会被分解。
（2）在40～45 ℃温度下搅拌处理的原因是________________；最后升温到90～92℃再冷却罐装的目的是________。
（3）下面左图表示温度对果胶酶活性的影响，如果纵坐标表示果粒的生成速率，横坐标表示温度，请在下面右图中画出果粒生成速率的曲线图（所绘制的曲线大体符合事实即可）。
(16分)下图是月季的花药离体培养过程，请回答下列问题。
（1）对绝大多数植物而言，适宜花粉培养的时期是________期。为确定花粉是否处于该时期，最常用的着色方法是________，对于不易着色的花粉细胞核，需采用。
（2）花粉在发育过程中要经历___________ 、___________ 、___________ 等阶段。
（3）花粉植株产生途径除了图中所示外，还可以通过________阶段发育而来。
（4）要想该花粉植株正常繁殖，一般需用________处理其幼苗。
有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成土壤污染。某同学欲从受到原油污染土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和。
（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。
（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。
(6分)新鲜柑橘的销售受市场行情影响较大，为满足不同人的需求，可以将柑橘加工成果汁、果酒、果醋等．结合下图回答相关问题：
（1）通过过程③制作果酒，市场接种的菌种是酵母菌，其发酵的适合温度为℃左右．在过程③中不用灭菌一般也不会受到杂菌的污染，原因是(写出一点即可)．
（2）果酒制作是否成功，需发酵后用来鉴定，在酸性条件下，该物质与酒精反应呈现．
（3）选用新鲜而不是干枯的柑橘果皮作为提取香精油的材料，理由是新鲜柑橘果皮．
（4）现获得一株突变柑橘，要在较短时间内获得大量该突变植株，最好采用的方法。